2024-411
如何選擇細(xì)菌接種方法?細(xì)菌的接種方法有很多種,如劃線法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養(yǎng)基接種法、螺旋接種法等,其方法和應(yīng)用各有不同,小助手將一一解釋,以幫助實(shí)驗(yàn)人員選擇操作。一、劃線法用途:主要用于菌種分純,獲得單菌落。實(shí)驗(yàn)步驟:由接種環(huán)沾取少許待分離的材料,在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線(詳見圖1),微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來(lái),如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經(jīng)培養(yǎng)后,可在平板表面得到單菌落。優(yōu)點(diǎn):可以觀察菌...
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2024-411
海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1、儀器二氧化碳培養(yǎng)箱,解剖鏡,眼科鑷,眼科剪2、動(dòng)物新生鼠(SD大鼠)3、耗材DMEM/F12培養(yǎng)基、聚賴氨酸實(shí)驗(yàn)步驟:包被:培養(yǎng)前一天將培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶或皿用0.01%多聚賴氨酸包被過(guò)夜。第二天早上來(lái)吸除包被液在無(wú)菌超凈臺(tái)中自然晾干后放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中備用。配制神經(jīng)元專用培養(yǎng)基(DMEM/F12培養(yǎng)基中添加1%谷氨酰胺,2%B27,1%雙抗)取腦:選取新生24h之內(nèi)的SD大鼠數(shù)只,雌雄不限,75%酒精全身消毒,斷頭處死,無(wú)菌條件下分層剪開頭皮,...
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2024-410
此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下:1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2mlLB培養(yǎng)基2、37℃振蕩培養(yǎng)箱過(guò)夜3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5min6、加入0.15ml預(yù)冷溶...
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2024-410
三聚氰胺(C3H6N6)是一種有機(jī)化合物,因其化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有三個(gè)氰基(-CN)而得名。在實(shí)驗(yàn)中使用真空干燥箱進(jìn)行三聚氰胺實(shí)驗(yàn),可能是為了在低壓環(huán)境下除去三聚氰胺樣品中的水分,以獲得干燥的樣品。以下是一個(gè)簡(jiǎn)化的實(shí)驗(yàn)步驟,但請(qǐng)注意,具體實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范和化學(xué)品操作指南。實(shí)驗(yàn)步驟:準(zhǔn)備:確保實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)良好,穿戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備,如實(shí)驗(yàn)服、手套、護(hù)目鏡等。稱量:準(zhǔn)確稱取一定量(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定)的三聚氰胺樣品。裝樣:將稱量好的三聚氰胺樣品放入干燥的試管或者稱量瓶中。預(yù)干...
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2024-49
箱式電阻爐是一種常見的電爐形式,分為立式,臥式,分體式,一體式。使用溫度為1200度以下,1400度以下,1600度以下,1700度以下,分別以電阻絲、硅碳棒、硅鉬棒為發(fā)熱元件,根據(jù)需要可選擇,箱式電爐除通常在空氣中加熱外,還有可通氣氛和密封抽真空電爐,形式多樣。廣泛用于陶瓷、冶金、電子、玻璃、化工、機(jī)械、耐火材料、新材料開發(fā)、特種材料、建材等領(lǐng)域的生產(chǎn)及實(shí)驗(yàn)。箱式電阻爐使用注意事項(xiàng):1.使用時(shí)爐膛溫度不得超過(guò)額定爐溫,也不要長(zhǎng)時(shí)間工作在額定溫度以上。2.工作環(huán)境條件為:溫度...
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2024-48
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循實(shí)行“3R原則”,包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的替代、減少和優(yōu)化原則,其中減少即指盡量減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量。查閱文獻(xiàn),并未發(fā)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)目有絕對(duì)要求,但在減少的同時(shí),一定要滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。統(tǒng)計(jì)學(xué)上要求一般至少每組有6個(gè)可用數(shù)據(jù),才有意義。一般小鼠的每組一般不少于10只;一般大鼠每組不少于6只;大動(dòng)物等級(jí)越高,價(jià)格越貴,根據(jù)情況可適當(dāng)減少,但一般不能少于4-5只。作為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)者,我們不僅僅知其然,也要知其所以然1、為什么要進(jìn)行樣本量估算?科學(xué)性要求:使研究設(shè)計(jì)更加嚴(yán)謹(jǐn)。倫理學(xué)...
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2024-48
細(xì)胞傳代培養(yǎng)的流程和注意事項(xiàng)如下:1、當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到其生長(zhǎng)密度高處時(shí)(一般腫瘤細(xì)胞為80-100%,原代細(xì)胞和干細(xì)胞為80-90%,有些細(xì)胞為40-50%,熟知所養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)密度極限),移除舊培養(yǎng)液;2、用PBS洗滌兩次(舊培養(yǎng)中的鈣離子會(huì)抑制胰酶的活性),加入1ml胰酶消化液(以T25培養(yǎng)瓶為例),立即蓋好蓋子,把培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察,如大部分細(xì)胞變圓,立即移除胰酶消化液(如大部分細(xì)胞漂起,可不移除胰酶消化液),加入5ml預(yù)熱培養(yǎng)基,用吸管取培養(yǎng)液吹打瓶壁細(xì)胞,使其脫...
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2024-43
TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡原理和經(jīng)驗(yàn)細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè),這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。由此,TUNEL成為了檢測(cè)DNA片段化(細(xì)胞凋亡)的方法。...
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